• 乙肝药物开发RNAi激活剂,抑制基因表达,临床前研究艰
    发布日期:2020-11-19 20:17   来源:未知   阅读:

南非约翰内斯堡威特沃特斯兰德大学健康科学学院病理学院抗病毒基因治疗研究室研究人员Fiona van den Berg及其同事,证明了将长双链RNA引入线虫体可引起有效和特异的沉默,本文依然是深入介绍,RNAi激活剂。

乙肝药物开发RNAi激活剂,抑制基因表达,临床前研究艰辛道路

研究表明,使用这种方法可以抑制HBV基因表达。然而,在哺乳动物细胞中诱导RNAi的最初尝试以失败告终。研究人员解释,因为长双链RNA诱导干扰素反应,导致非特异性基因沉默和凋亡。对该途径的解释表明,大的双链RNA被加工成21-23个核苷酸双工体,称为小干扰RNA(siRNA)。sirna在3′端有5′磷酸、2′羟基和两个核苷酸的悬垂。随后,化学合成的具有这些特征的短RNA双工体,在体外被证明能够沉默基因。

当在哺乳动物细胞中测试时,这些siRNAs在没有诱导干扰素反应的情况下,实现了沉默。这是相关领域的一项开创性研究,因为它拓宽了RNAi的范围,并为其作为一种治疗方式铺平了道路。RNAi激活剂指什么?它其实是合成和表达RNA干扰(RNAi)途径的激活剂,A:小干扰RNA(siRNA)通常作为合成序列产生,与19-21个核苷酸双链RNA完全匹配,有2个3′核苷酸悬置。

每条链含有末端5′磷酸和3′羟基。siRNAs模拟miRNA双工,当被RNA诱导沉默复合物(RISC)占据时进入RNAi途径。链选择发生在去除乘客链和激活的RISC沉默同源mRNA。B:短发夹状RNA(shRNAs)通常由RNA聚合酶III启动子表达,作为一个折叠成茎环的RNA序列。作为pre-miRNA的模拟物,shRNA被Dicer识别和处理,形成sirna,然后进入RISC。C: 人工前miRNA是不完全匹配的干环RNA,类似于自然发生的前miRNA。因此,它们被Dicer处理成miRNA双工,然后进入RISC。D: 人工pri-miRNAs(aprimirnas)的设计基于自然发生的pri-miRNA的结构,由微处理器复合体识别和处理,从细胞核输出,经Dicer处理,再由RISC处理。

早期时,全球相关领域研究人员已经探索了利用DNA表达RNAi激活因子。这需要从2个表达盒中,表达siRNA的每一条链[40]或短发夹RNA(shRNAs)的转录。RNA聚合酶III启动子驱动的shRNA表达,被证明是非常有效的,但是考虑到当时RNAi的知识,还不清楚发夹是如何实现基因沉默的。目前已经很清楚shRNAs通过模拟miRNA前体盒siRNAs,通过模拟成熟miRNA双工体来诱导RNAi途径。

这个简单的概念,奠定了通过合成或表达的外源序列来重新编程RNAi途径的基础,这些序列模拟了该途径的各种中间产物。后来的RNAi的外源性激活剂,被设计成更接近于miRNAs,并被恰当地命名为人工miRNA。在哺乳动物细胞中,研究人员发现,确实可以通过合成siRNA触发RNAi的发现,并促进了沉默途径在病毒感染中的应用。

小番健康结语:总体上看,这种促进沉默途径也适合乙肝病毒感染,在体外和体内,全球肝病学领域研究人员共同努力实现siRNA介导的病毒基因沉默。最初这种研究是有希望的,并证明靶向乙肝病毒RNA抑制复制的潜力。由于乙肝病毒基因组的排列方式,病毒产生了一个3′端重叠的转录物,单个siRNA可以同时影响多种病毒因子(Viruses)。

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